Validación y estabilidad de tirostáticos sin derivatizar en orina de bovinos por cromatografía líquida con detector de triple cuadrupolo
Palabras clave:
Tirostáticos, Orina, Validación, Estabilidad, UHPLC-MS/MSResumen
Los tirostáticos son sustancias farmacológicamente activas prohibidas en bovinos y otras especies destinadas a consumo por la Unión Europea según la Directiva del Consejo 96/22/CE. El siguiente trabajo presenta la validación de un método de detección y confirmación para el análisis rutinario de tirostáticos en orina sin derivatizar, por cromatografía líquida de alto rendimiento asociado a un espectrómetro de masas triple cuadrupolo (LC-MS/MS), mediante una desnaturalización de la muestra y una extracción líquido-líquido con acetato de etilo. Es un método analítico rápido y simple en el rango de 5 – 20 µg L-1 para cuantificar tiouracilo, fenil-tiouracilo, metil-tiouracilo, propil-tiouracilo y tapazol, además de cumplir los criterios analíticos con coeficientes de regresión (R2)>0.995 para todos los analitos estudiados, límite de decisión (CCα) en el rango de 0.4 a 1.8 µg L-1 y capacidad de detección (CCβ) entre 1.0 y 2.8 µg L-1. Este método se validó de acuerdo con la legislación del SENASA (Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria), que se encuentra en concordancia con los criterios de validación de la UE (Unión Europea) según la Decisión de la Comisión 2002/657/EC.
Citas
Comisión del Codex Alimentarius (2006). “Directrices sobre la estimación de la incertidumbre de los resultados”. Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura / Organización Mundial de la Salud. (CAC/GL 59). Disponible en: https://www.fao.org/fao-who-codexalimentarius/codex-texts/guidelines/es/
Comisión Europea (2002). “Decisión 2002/657/CE, por la que se aplica la Directiva 96/23/CE del Consejo en cuanto al funcionamiento de los métodos analíticos y la interpretación de los resultados”. Disponible en: http://data.europa.eu/eli/dec/2002/657/oj
Consejo de la Unión Europea (1981). “Directiva 81/602/CEE referente a la prohibición de determinadas sustancias de efecto hormonal y de sustancias de efecto tireostático”. Disponible en: https://eur-lex.europa.eu/eli/dir/1981/602/oj
Consejo de la Unión Europea (1996). “Directiva 96/22/CE por la que se prohíbe utilizar determinadas sustancias de efecto hormonal y tireostático y sustancias β-agonistas en la cría de ganado y por la que se derogan las Directivas 81/602/CEE, 88/146/CEE y 88/299/CEE”. Disponible en: https://eur-lex.europa.eu/eli/dir/1996/22/oj
De Wasch, K.; De Brabander, H. F.; Impens, S.; Vandewiele, M.; Courtheyn, D. (2001). “Determination of mercaptobenzimidazol and other thyreostat residues in thyroid tissue and meat using high-performance liquid chromatography–mass spectrometry”. Journal of Chromatography A (912, pp. 311-317). Disponible en: https://doi.org/10.1016/s0021-9673(01)00563-5
Guidance Document (2020). “EURL guidance on minimum method performance requirements (MMPRs) for specific pharmacologically active substances in specific animal matrices". Disponible en: https://sitesv2.anses.fr/en/system/files/EURL_MMPR_guidance%20paper_final.pdf
Kiebooms, J. A.; Vanden Bussche, J.,; Hemeryck, L. Y.; Fievez, V.; Vanhaecke, L. (2012). “Intestinal microbiota contribute to the endogenous formation of thiouracil in livestock”. Journal of Agricultural and Food Chemistry (60, pp. 7769−7776). Disponible en: https://doi.org/10.1021/jf3017145
Lõhmus, M.; Kallaste, K.; Le Bizec, B. (2009). “Determination of thyreostats in urine and thyroid gland by ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry”. Journal Chromatography A (1216, pp. 8080-8089). Disponible en: https://doi.org/10.1016/j.chroma.2009.04.005.
Pinel, G.; Bichon, E.; Pouponneau, K.; Maume, D.; Andre, F.; Le Bizec, B. (2005). “Multi-residue method for the determination of thyreostats in urine samples using liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry after derivatisation with 3-iodobenzylbromide”. Journal Chromatography A (1085, pp. 247-252). Disponible en: https://doi.org/10.1016/j.chroma.2005.06.055
Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos (1997). “Resolución 370/97: Requisitos para la exportación de carnes procedentes de la faena de bovinos, ovinos, caprinos y cérvidos destinados a la Unión Europea”. Disponible en: https://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/anexos/40000-44999/43872/norma.htm
Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentos (2006). “Resolución 148/06: Prohíbese el uso de productos veterinarios indicados como promotores de crecimiento, que contengan en su formulación sustancias de acción beta agonista o sustancias con acción tirostática”. Disponible en: https://www.argentina.gob.ar/normativa/nacional/resoluci%C3%B3n-148-2006-115400/texto
Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (2002). “Resolución 138/2002: Control de productos de origen animal”. Disponible en: http://www.senasa.gob.ar/normativas/resolucion-138-2002-senasa-servicio-nacional-de-sanidad-y-calidad-agroalimentaria
Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (2004). “Disposición 06/2004: Control de productos de origen animal”. Dirección de Laboratorios y Control Técnico. Disponible en: https://www.argentina.gob.ar/normativa/nacional/disposici%C3%B3n-6-2004-101460
Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (2006). “Disposición 125/2006: Confirmaciones de residuos de sustancias prohibidas. Incorpóranse 'parámetros de validación'”. Dirección de Laboratorios y Control Técnico. Disponible en: https://www.argentina.gob.ar/normativa/nacional/disposici%C3%B3n-125-2006-115884/texto
Vanden Bussche, J. (2011). “Analytical approaches to unravel the semi-endogenous status of Thiouracil”. Tesis doctoral. Ghent University, Faculty of Veterinary Medicine.
Vanden Bussche, J.; Noppe, H.; Verheyden, K.; Wille, K.; Pinel, G.; Le Bizec, B.; De Brabander, H. F. (2009). “Analysis of thyreostats: A history of 35 years”. Analytica Chimica Acta (637, pp. 2-12). Disponible en:
https://doi.org/10.1016/j.aca.2008.08.027.
Vanden Bussche, J.; Sterk, S. S.; De Brabander, H. F.; Blokland, M. H.; Deceuninck, Y.; Le Bizec, B.; Vanhaecke, L. (2012). “Thyreostatic drugs, stability in bovine and porcine urine”. Analytical and Bioanalytical Chemistry (403, pp. 2973-2982). Disponible en: https://doi.org/10.1007/s00216-012-5739-7
Vanden Bussche, J.; Vanhaecke, L.; Deceuninck, Y.; Verheyden, K.; Wille, K.; Bekaert, K.; Le Bizec, B.; De Brabander, H.F. (2010). “Development and validation of an ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry method for quantifying thyreostats in urine without derivatisation”. Journal of Chromatography A (1217, pp. 4285–4293). Disponible en: https://doi.org/10.1016/j.chroma.2010.04.030
Vanden Bussche, J.; Vanhaecke, L.; Deceuninck, Y.; Wille, K.; Bekaert, K.; Le Bizec, B.; De Brabander, H. F. (2011). “Ultra-high performance liquid chromatography coupled to triple quadrupole mass spectrometry detection of naturally occurring thiouracil in urine of untreated livestock, domesticated animals and humans”. Food Additives and Contaminants (Part A, 28, pp. 166−172). Disponible en: https://doi.org/10.1080/19440049.2010.544681
Wauters, J.; Vanden Bussche, J.; Le Bizec, B.; Kiebooms, J. A.; Dervilly-Pinel, G.; Prevost, S.; Wozniak, B.; Sterk, S. S.; Grønningen, D.; Glenn Kennedy, D.; Russell, S.; Delahaut, P.; Vanhaecke, L. (2015). “Toward a New European Threshold to Discriminate Illegally Administered from Naturally Occurring Thiouracil in Livestock”. Journal of Agricultural and Food Chemistry (63, 1339−1346). Disponible en: https://doi.org/10.1021/jf504475f.
Woźniak, B.; Witek, S.; Zmudzki, J.; Kłopot, A. (2012). "Natural Occurrence of Thiouracil in of livestock in Poland". Bulletinl of the Veterinary Institute in Pulawy (56, pp. 611-615). Disponible en: https://doi.org/10.2478/v10213-012-0108-z
Youden, W. J.; Steiner, E. H. (1975). “Statistical Manual of the AOAC–Association of Official Analytical Chemists”. AOAC-I, Washington DC. (p. 35 ff).
